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鼠单克隆抗体制备技术概述:基本原理与实验流程解析


鼠单克隆抗体.png鼠单克隆抗体是指通过单一B细胞克隆产生、对特定抗原表位具有高度特异性的免疫球蛋白分子,通常来源于小鼠免疫体系。与多克隆抗体相比,单克隆抗体在分子组成、抗原识别位点及实验表现方面具有更高的一致性。

在分子结构上,鼠单克隆抗体由两条重链和两条轻链组成,其可变区决定抗原识别特异性,恒定区决定抗体亚型属性。由于来源明确且克隆单一,鼠单克隆抗体在免疫学和分子生物学研究中被广泛采用。



鼠单克隆抗体制备的技术原理

鼠单克隆抗体制备基于杂交瘤(Hybridoma)技术。该技术的核心原理是将具有特定抗原识别能力的 B 淋巴细胞与具备持续增殖能力的骨髓瘤细胞进行融合,从而获得既能稳定分泌抗体、又能长期增殖的杂交细胞系。

通过对杂交细胞的筛选和克隆化,可以获得来源单一、抗原特异性明确的抗体分泌细胞株,进而获得结构和功能高度一致的单克隆抗体。


鼠单克隆抗体制备的实验流程概述

在行业通行的技术体系中,鼠单克隆抗体制备通常遵循以下实验流程。

◆ 抗原免疫与免疫反应建立:实验流程首先通过抗原免疫诱导小鼠体内产生针对目标抗原的免疫应答,使特异性 B 细胞在体内扩增并成熟。该阶段的目标是获得具备明确抗原识别能力的 B 淋巴细胞群体。

◆ B 细胞分离:在免疫反应建立后,从免疫小鼠的相关免疫组织中分离获得抗体分泌 B 细胞。这些细胞携带编码特定抗体的遗传信息,但自身不具备长期体外增殖能力。

◆ 细胞融合(杂交瘤形成):分离得到的 B 细胞与骨髓瘤细胞进行融合,形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞同时具备:B 细胞的抗体分泌能力;骨髓瘤细胞的持续增殖能力,该步骤是单克隆抗体制备的核心技术环节。

◆ 杂交瘤筛选:融合后形成的细胞群体中包含多种不同类型细胞,需要通过筛选手段,保留能够分泌目标抗体的杂交瘤细胞,并去除未融合细胞或不相关克隆。

◆ 单克隆化:通过限制性稀释或等效策略,对阳性杂交瘤进行单克隆化操作,确保每一株细胞来源于单一细胞。该步骤是保证抗体“单克隆”属性的关键。

◆ 抗体获得与基本特性确认:经确认的杂交瘤克隆可持续分泌特定抗体。通常需要对抗体的基本属性进行确认,包括:抗原结合特异性、抗体亚型、分子完整性,以明确其后续使用边界。

流程图新.png

▌鼠单克隆抗体的常见类型

◆ 按免疫球蛋白亚型分类:常见鼠单克隆抗体亚型包括 IgG1、IgG2a、IgG2b 和 IgG3 等,不同亚型在结构稳定性和实验适用性方面存在差异。

◆ 按抗原表位类型分类:识别线性表位的单克隆抗体;识别构象表位的单克隆抗体;不同表位类型决定抗体在不同实验体系中的表现特征。


▌实验应用中的一致性特征

由于来源于单一杂交瘤细胞克隆,鼠单克隆抗体在批次间通常具有良好的一致性。这一特性使其在长期实验项目和重复性研究中具有明显优势。


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发布时间:2025-12-18